Mytilène est une ville principale située sur l'île de Lesbos, dans la mer Égée, près de la côte nord-ouest de l'Asie Mineure. C'était un port maritime doté de deux ports. À l'origine, elle a été construite sur une petite île séparée de Lesbos.
À l'époque du Nouveau Testament, une chaussée surélevée traversait un étroit bras de mer, la reliant à l'île principale. Actes 20.14 identifie Mytilène comme l'un des lieux où Paul et ses compagnons de voyage se sont arrêtés pour la nuit, alors qu'ils naviguaient vers Jérusalem.